原代細胞的分離培養：

原代培養即直接從有機體取下細胞、組織或器官，讓它們在體外維持與生長(cháng)。原代培養的特點(diǎn)是細胞或組織剛離開(kāi)機體，它們的生物性狀尚未發(fā)生很大的改變，在一定程度上可反映它們在體內的狀態(tài)，表現出來(lái)源組織或細胞的特性， 因此用于藥物實(shí)驗，尤其是藥物對細胞活動(dòng)、結構、代謝、有無(wú)毒性或殺傷作用等，是的工具。常用的原代培養法有組織塊培養法和消化培養法。

（一）組織塊培養法

許多實(shí)驗室喜歡用組織塊培養法進(jìn)行原代培養，因為方法簡(jiǎn)單，細胞也較容易生長(cháng)。尤其是培養心肌，有時(shí)還可觀(guān)察到心肌組織塊搏動(dòng)。細胞從組織塊邊緣向外長(cháng)出并鋪滿(mǎn)培養皿或培養瓶后， 即可進(jìn)行傳代。

1. 設備材料

培養箱、冰箱、超凈工作臺／無(wú)菌間、無(wú)菌吸管、離心管、酒精燈、試管架、培養瓶、培養皿、消化液、基礎培養液、胎牛血清、Hanks 溶液、雙抗試液、剪刀、攝子、小燒杯。

2. 操作步驟

（1） 在無(wú)菌條件下，取待培養的組織適量，置入小燒杯中， 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉組織塊表面的血污。

（2）用眼科剪將組織塊反復剪成0.5~ 1mm3的小塊。

（3）再用Hanks 溶液反復漂洗， 直至液體不混濁為止。等組織塊下沉，將燒杯傾斜，用小吸管盡量吸除Hanks 溶液。

（4）用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml、200μg/ml）的培養液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培養液。

（5）用彎頭吸管吸取組織小塊，均勻地置于培養皿內表面，吸去多余的培養液，各組織小塊之間相距0.5cm 為宜。蓋好培養皿蓋，做好標記， 置37°C 的CO2培養箱內。

（6） 2~4h 后，于超凈工作臺中，緩緩地向培養皿中加入上述含20％血清及雙抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml ）的培養液少量，以使組織塊浸沒(méi)在培養液中。

（7）輕輕地將培養皿及組織塊移至CO2 培養箱， 如無(wú)特殊情況，不必觀(guān)察。1~2 周后，可觀(guān)察到細胞從組織塊邊緣長(cháng)出，形成生長(cháng)暈。

（9） 一般說(shuō)來(lái)，若培養液無(wú)明顯改變， 1 周換液1 次即可。待細胞長(cháng)滿(mǎn)整個(gè)培養皿內表面，即可進(jìn)行傳代培養。

CD8+T人淋巴細胞

細胞基本屬性：

細胞鑒定：流式檢測CD3+CD8+ >97%

支原體檢測：無(wú)

產(chǎn)品規格：5x105cells/T25或1mL凍存管

培養基：CD8+T人淋巴細胞專(zhuān)用培養基

培養條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件：無(wú)血清凍存液，液氮儲存

細胞代數：1代

產(chǎn)品貨期現貨，1周左右

運輸方式T25培養瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應限制僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類(lèi)疾病的治療產(chǎn)品使用

公司正在出售的產(chǎn)品：

血小板活化因子抗體

通用型HSV(HERPESSIMPLX)病毒定性檢測試劑盒20次

CLIAKitforLepIgGISAKit大鼠鉤端IgG規格：48T/96T

ELISAKitα1-MGα1微球蛋白規格：48T/96T

大鼠成纖維細胞生長(cháng)因子19(FGF19)ELISA試劑盒 ，英文名： FGF19 ELISA Kit

Rat leukemia inhibitory factor (LIF) ELISA Kit 大鼠白血病抑制因子(LIF)ELISA試劑盒

Humaecombinationactivatinggene2,RAG-2ELISA試劑盒人重組激活基因2(RAG-2)ELISA試劑盒規格：96T/48T

PDGFsR-α小鼠血小板衍生生長(cháng)因子可溶性受體α規格：48T/96T

HumanCholicacid，CAELISAKit人膽酸(CA)ELISA試劑盒規格：96T/48T

人前鐵調素(Pro-Hepcidin)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

小鼠血管內皮細胞生長(cháng)因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)免疫試劑盒 Mouse Vascular endothelial cell growth factor receptor 2,VEGFR-2/Flk-1 ELISA kit

氧化酶(XOD)測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣

RatMullerianInhibitingSubstance/Ai-Mullerianhormone,MIS/AMHELISA試劑盒大鼠繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激素(MIS/AMH)ELISA試劑盒規格：96T/48T

humanHepatitisDvirusIgG,HDVIgGELISA試劑盒人丁型肝炎IgG(HDVIgG)ELISA試劑盒規格：96T/48T

Humanlumican,LUMELISAKit人基膜聚糖/內腔蛋白(LUM)ELISA試劑盒規格：96T/48T

大鼠血小板衍生生長(cháng)因子AA(PDGF-AA)ELISA試劑盒 ，英文名： PDGF-AA ELISA Kit

腫瘤壞死因子配體超家族成員15抗體

骨形態(tài)發(fā)生蛋白4抗體

溶質(zhì)載體鋅轉運3抗體

MPND蛋白抗體

銜接蛋白β抗體

白細胞共同抗原CD45抗體

磷酸化MAP激酶相互作用絲/蘇激酶1抗體

CD8+T人淋巴細胞CD70抗體

操作方法：

組織塊直接培養法（原代細胞培養實(shí)驗）

材料與儀器

【動(dòng)物】選擇大約一半足孕時(shí)間的胚胎，10－13天齡胚胎含有最大數量的未分化的間質(zhì)細胞，成纖維細胞可從這些細胞衍生獲得。每組小鼠胚胎1個(gè)【實(shí)驗材料】每組的超凈臺中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml 0.25%瓶；PBS(-)1瓶2.100ml滅菌燒杯2個(gè)；3、50ml離心筒2個(gè)4、滅菌培養皿1個(gè)，細胞培養瓶1個(gè)5、1ml，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)6、細胞計數板1塊；7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；8、酒精燈1臺；

步驟

1) 胚胎的分離。適用哺乳動(dòng)物(倉鼠、小鼠和大鼠)2)將1－2個(gè)胚胎轉移至一個(gè)小的無(wú)菌培養皿中，用新的無(wú)菌剪刀小心地絞碎胚胎，用PBS漂洗。3)在無(wú)菌狀態(tài)下，將絞碎的胚胎轉移于一50ml的無(wú)菌離心筒中,加入40ml 0.25％的無(wú)菌,用攪拌棒輕輕攪動(dòng)。4)在溫暖的環(huán)境中或置于37°C培養箱中輕輕搖動(dòng)15分鐘。5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降，將含有懸浮細胞的液體轉移至一無(wú)菌50ml的離心管中，該管內按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,。6)加人新鮮溶液(見(jiàn)前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來(lái)的50ml離心筒中，重復步驟4和5。7)離心混合的細胞懸液，1200r/rain，5分鐘，棄上清。8)用新鮮的無(wú)菌PBS重懸沉淀的細胞，按步驟7再次離心。9)用PBS反復洗滌細胞直至上清清亮為止。