型 號
產(chǎn)品時(shí)間2023-11-06
所屬分類(lèi)蔗糖系列
報價(jià)300
商品屬性：
產(chǎn)品名稱(chēng)：蔗糖磷酸合成酶（SPS)生化檢測試劑盒
規格：100管/48樣 50管/24樣
貨號 : EY-01S1221
測試方法:微量法 可見(jiàn)分光光度法
分類(lèi)：蔗糖系列
商品詳情：
測定意義
蔗糖不僅是重要的光合產(chǎn)物，也是植物體內運輸的主要物質(zhì)，還是碳水化合物的貯存形式之一。SPS（EC 2.4.1.14）以果糖-6-磷酸為受體，形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶系統看作是蔗糖合成的主要途徑。
測定原理
蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸，蔗糖磷酸與反應可呈現顏色變化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小與顏色的深淺成正比。
需自備的的儀器和用品
可見(jiàn)分光光度計/酶標儀、水浴鍋、離心機、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰
粗酶液提?。?/p>
1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。16000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測。
2、細菌、真菌：按照細胞數量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；16000g， 4℃離心20min，取上清液置冰上待測。
3、血清等液體：直接測定。
ADH測定操作：
1. 分光光度計預熱30 min，調節波長(cháng)到340 nm，蒸餾水調零。
2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。
3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四，迅速混勻后于340nm測定吸光值變化，分別記錄15s和75s時(shí)吸光值，分別記為A1和A2?！鰽測定管=A1-A2。
測定步驟：
1、分光光度計預熱30min以上，調節波長(cháng)至340nm，蒸餾水調零。
2、將試劑二在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。
3、操作表：
試劑名稱(chēng)（μL） | 測定孔 |
樣本 | 20 |
試劑二 | 760 |
試劑三 | 10 |
試劑四 | 10 |
將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，混勻后立即在340 nm波長(cháng)下記錄初始吸光度A1和反應1min后的吸光度A2，計算ΔA=A1-A2。
注意：若A1-A2大于0.5，需將樣本用提取液稀釋?zhuān)笰1-A2小于0.5，可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
NAD-MDH活力單位的計算：
1、血清（漿）NAD-MDH活力的計算
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=6430×ΔA
2、組織、細菌或細胞中NAD-MDH活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T =6430×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（2000×V樣÷V樣總）÷T=3.215×ΔA
V反總：反應體系總體積，8×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時(shí)間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；2000：細胞或細菌總數，2000萬(wàn)。
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