型 號
產(chǎn)品時(shí)間2023-11-05
所屬分類(lèi)輔酶Ⅰ系列
報價(jià)300
產(chǎn)品名稱(chēng):乙醇含量生化檢測試劑盒
規格:100管/96樣 50管/48樣
貨號 : EY-01S110
測試方法:微量法 可見(jiàn)分光光度法
分類(lèi):輔酶Ⅰ系列
測定意義:
酒是含酒精(乙醇)飲料的統稱(chēng),乙醇是酒的主要成分,是衡量酒質(zhì)量的重要指標之一。我國是早發(fā)明釀酒的國家,也是酒類(lèi)產(chǎn)品消費大國,其消費量居世界。因此,快速、準確測定酒中乙醇含量,對于確保酒的質(zhì)量和保護消費者的健康具有重大意義。
測定原理:
乙醇在乙醇脫氫酶的催化下氧化脫氫生成乙醛,同時(shí),NAD被還原生成NADH,NADH在1-mPMS的作用下使WST-8顯橙黃色,通過(guò)450 nm下測定吸光值變化可測得乙醇含量。
需自備的儀器和用品:
酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、96孔板、研缽、冰、蒸餾水。
試劑一:液體×1瓶,室溫保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×2瓶,-20℃保存。臨用前加入22mL試劑二,現配現用。
試劑四:液體×1支,4℃保存。
1、組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測。
2、細菌、真菌:按照細胞數量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);16000g, 4℃離心20min,取上清液置冰上待測。
3、血清等液體:直接測定。
(1)按照蛋白濃度計算
活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T
=1608×△÷Cpr
(2)按照樣本質(zhì)量計算
活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
ADH (nmol/min/g鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=1608×△A÷W
(3)按細胞數量計算
活性單位定義:25℃中每104個(gè)細胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細胞數量×V樣÷V樣總)÷T
=1608×△A ÷細胞數量
(4)按液體體積計算
活性單位定義:25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T
=1608×△A
ε:NADH摩爾消光系數,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V反總:反應體系總體積,1000μL=0.001 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;V樣:加入反應體系中上清液體積,100μL=0.1 mL;T:反應時(shí)間,1min。
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