產(chǎn)品名稱(chēng)：NAD激酶（NADK）生化檢測試劑盒

規格：100管/48樣 50管/24樣 

貨號 : EY-01S12

測試方法:微量法　可見(jiàn)分光光度法　　

分類(lèi)：輔酶Ⅰ系列

測定意義：

NADK（EC 2.7.1.23）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養細胞中，是目前所發(fā)現的生物體內惟一能夠催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶，可催化NAD(H)以ATP或無(wú)機多聚磷酸[poly(P)]作為磷?；w進(jìn)行磷酸化反應，生成NADP(H)。因此，NAD激酶在合成NADP(H)以及調節NAD(H)與NADP(H)的平衡上具有重要作用。

測定原理：

NADK催化NAD+磷酸化，生成NADP+；NADP+可被6-磷酸糖脫氫酶還原為NADPH；NADPH通過(guò)PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍（MTT），通過(guò)在600 nm下測定MTT的還原速度（吸光值的變化）可反映出NADK活性的大小。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑一：液體×1瓶，室溫保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存。              

試劑三：粉劑×2瓶，－20℃保存。臨用前加入22mL試劑二，現配現用。

試劑四：液體×1支，4℃保存。

1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。16000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測。

2、細菌、真菌：按照細胞數量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；16000g， 4℃離心20min，取上清液置冰上待測。

3、血清等液體：直接測定。

（1）按照蛋白濃度計算

活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T

=1608×△÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。

ADH (nmol/min/g鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A÷W

（3）按細胞數量計算

活性單位定義：25℃中每104個(gè)細胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。

ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細胞數量×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A ÷細胞數量

（4）按液體體積計算

活性單位定義：25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。

ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T

=1608×△A

ε：NADH摩爾消光系數，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V反總：反應體系總體積，1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；V樣：加入反應體系中上清液體積，100μL=0.1 mL；T：反應時(shí)間，1min。