感覺(jué)態(tài)細胞的儲存:
每次轉化時(shí)使用新鮮的細胞是明智的,因為長(cháng)時(shí)間儲存,轉化效率會(huì )降低,但這并不總是可行的。
感受態(tài)細胞可以存儲在-80°C長(cháng)達一年,沒(méi)有轉化潛能的損失。然而,瞬間凍結在液氮或-80°C冰箱是不建議的。需要在冷凍保護劑中,像哺乳動(dòng)物細胞一樣緩慢地冷凍。
使用硬紙板或聚苯乙烯泡沫塑料盒等儲存。
用紙片等將盒子里的細胞管隔開(kāi),分成多個(gè)小格子。
復蘇過(guò)程中,在37°C解凍細胞,轉化前用豐富培養基清洗防凍劑。
感覺(jué)態(tài)細胞的制備注意事項:
1、配制溶液的水受有機污染,會(huì )降低感受態(tài)的轉化率;
2、液氮速凍可以提高轉化效率約5倍;
3、甘油會(huì )使細菌沉淀附著(zhù)力降低;
4、感受態(tài)細胞是很脆弱的,實(shí)驗操作過(guò)程中,動(dòng)作要輕;
5、制備感受態(tài),所用的試劑及器具的潔凈程度要求高;操作要求嚴格;轉化效率高;
6、為達到高轉化效率,活細胞數需少于108個(gè)細胞/ml;
7、不同菌株之間,OD600的數值與每毫升中活細胞數間的關(guān)系很大;
8、在大腸桿菌生長(cháng)曲線(xiàn)上,在生長(cháng)初期和末期兩個(gè)時(shí)期獲得較高轉化率;
9、有實(shí)驗曾表明,可以在4℃在氯化鈣溶液中保存24-48h,在起初保存的12-24h內,轉化效率會(huì )有所提高,然后降低到初始水平;
10、對于克隆用途來(lái)說(shuō),每份細胞體積有50μl足矣;
11、玻璃管會(huì )降低轉化率約10倍。