5-羥色胺轉運體蛋白試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗。往預先包被胎盤(pán)催乳素抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物顯色,在過(guò)氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成黃色。顏色的深淺和樣品中試劑盒指標呈正相關(guān)。用酶標儀測定吸光度,計算樣品濃度。
5-羥色胺轉運體蛋白試劑盒的樣本實(shí)驗前準備:
液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
?。?)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應再次離心。
?。?)血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應再次離心。
?。?)尿液:
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
?。?)細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右。仔細收集上清。
?。?)培養細胞
檢測細胞內的成份時(shí),用PBS稀釋細胞懸液,細胞濃度高。通過(guò)反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應再次離心。
?。?)組織標本
切割標本后,稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS,或組織蛋白萃取試劑,用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。