商品屬性：

產(chǎn)品名稱(chēng)：二氫黃酮醇還原酶（DFR）生化檢測試劑盒

規格：100管/48樣 50管/24樣 

貨號 : EY-01S181

測試方法:微量法　可見(jiàn)分光光度法　　

分類(lèi)：氧化與抗氧化系列

商品詳情：

測定意義：

 二氫黃酮醇還原酶是類(lèi)黃酮合成途徑中的一個(gè)關(guān)鍵酶，在決定植物的花色、葉色、果色和其他經(jīng)濟器官的色澤及其營(yíng)養品質(zhì)方面起著(zhù)重要作用。

 測定原理：

 二氫黃酮醇還原酶作用于二氫槲皮素產(chǎn)生兒茶素，可與縮合形成紅色化合物，在500nm處有特征吸收峰。

 需自備的儀器和用品：

 研缽、低溫離心機、震蕩儀、氮吹儀、可見(jiàn)分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、水浴鍋、無(wú)水乙醇、乙酸乙酯。

粗酶液提?。?/p>

1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。16000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測。

2、細菌、真菌：按照細胞數量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；16000g， 4℃離心20min，取上清液置冰上待測。

3、血清等液體：直接測定。

ADH測定操作：

1. 分光光度計預熱30 min，調節波長(cháng)到340 nm，蒸餾水調零。

2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。

3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四，迅速混勻后于340nm測定吸光值變化，分別記錄15s和75s時(shí)吸光值，分別記為A1和A2?！鰽測定管=A1-A2。

測定步驟：

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長(cháng)至340nm，蒸餾水調零。

2、將試劑二在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。

3、操作表：

將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，混勻后立即在340 nm波長(cháng)下記錄初始吸光度A1和反應1min后的吸光度A2，計算ΔA=A1-A2。

注意：若A1-A2大于0.5，需將樣本用提取液稀釋?zhuān)笰1-A2小于0.5，可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應稀釋倍數。

NAD-MDH活力單位的計算：

1、血清（漿）NAD-MDH活力的計算

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=6430×ΔA

2、組織、細菌或細胞中NAD-MDH活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T =6430×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（2000×V樣÷V樣總）÷T=3.215×ΔA

V反總：反應體系總體積，8×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時(shí)間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；2000：細胞或細菌總數，2000萬(wàn)。

公司正在銷(xiāo)售的產(chǎn)品：