型 號
產(chǎn)品時(shí)間2023-11-05
所屬分類(lèi)氮代謝系列
報價(jià)200
商品屬性:
產(chǎn)品名稱(chēng):食品中亞硝酸鹽含量生化檢測試劑盒
規格:100管/96樣 50管/48樣
貨號 : EY-01S195
測試方法:微量法 可見(jiàn)分光光度法
分類(lèi):氮代謝系列
商品詳情:
測定意義:
在食品中,亞硝酸鹽可與肉品中的肌紅素結合而更安定,在食品加工業(yè)中作為保色劑,以維持肉制品的良好外觀(guān),并防止肉毒梭狀芽孢桿菌的產(chǎn)生,提高食用肉制品的安全,但是人體長(cháng)期攝入亞硝酸鹽過(guò)量的食品,可誘發(fā)消化系統癌變。
測定原理:
在酸性條件下,亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸反應生成重氮化合物,再與N-1-萘基乙二胺形成紫紅色偶氮化合物,在540nm處有特征吸收峰。
自備實(shí)驗用品及儀器:
天平、研缽或勻漿器、水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
粗酶液提?。?br/>
1、組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測。
2、細菌、真菌:按照細胞數量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);16000g, 4℃離心20min,取上清液置冰上待測。
3、血清等液體:直接測定。
ADH測定操作:
1. 分光光度計預熱30 min,調節波長(cháng)到340 nm,蒸餾水調零。
2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。
3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽測定管=A1-A2。
測定步驟:
1、分光光度計預熱30min以上,調節波長(cháng)至340nm,蒸餾水調零。
2、將試劑二在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。
3、操作表:
試劑名稱(chēng)(μL) | 測定孔 |
樣本 | 20 |
試劑二 | 760 |
試劑三 | 10 |
試劑四 | 10 |
將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,混勻后立即在340 nm波長(cháng)下記錄初始吸光度A1和反應1min后的吸光度A2,計算ΔA=A1-A2。
注意:若A1-A2大于0.5,需將樣本用提取液稀釋?zhuān)笰1-A2小于0.5,可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
NAD-MDH活力單位的計算:
1、血清(漿)NAD-MDH活力的計算
單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=6430×ΔA
2、組織、細菌或細胞中NAD-MDH活力的計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T =6430×ΔA÷W
(3)按細菌或細胞密度計算:
單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總)÷T=3.215×ΔA
V反總:反應體系總體積,8×10-4 L;ε:NADH摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時(shí)間,1 min;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;2000:細胞或細菌總數,2000萬(wàn)。
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