測定意義：果膠裂解酶（EC4.2.2.10）是果膠酶的重要組成部分，是一種能降解植物細胞壁，導致植物組織軟化甚至死亡的解聚酶，來(lái)源比較廣泛，主要來(lái)源于微生物，可用于果汁、果酒的澄清，提高水果出汁率，植物病毒的純化，紙漿的漂白和紡織品的生物精煉，在減少環(huán)境污染和降低能源消耗方面具有潛在的應用價(jià)值。

測定原理：果膠裂解酶作用于果膠中的α-1,4糖苷鍵，生成在還原端C4和C5之間位置具有不飽和鍵的不飽和寡聚半乳糖醛酸，在235nm處有特征吸收峰。

自備實(shí)驗用品及儀器：

天平、低溫離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

試劑一：液體×1瓶，室溫保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存。              

試劑三：粉劑×2瓶，－20℃保存。臨用前加入22mL試劑二，現配現用。

試劑四：液體×1支，4℃保存。

1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。16000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測。

2、細菌、真菌：按照細胞數量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；16000g， 4℃離心20min，取上清液置冰上待測。

3、血清等液體：直接測定。

（1）按照蛋白濃度計算

活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T

=1608×△÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。

ADH (nmol/min/g鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A÷W

（3）按細胞數量計算

活性單位定義：25℃中每104個(gè)細胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。

ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細胞數量×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A ÷細胞數量

（4）按液體體積計算

活性單位定義：25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。

ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T

=1608×△A

ε：NADH摩爾消光系數，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V反總：反應體系總體積，1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；V樣：加入反應體系中上清液體積，100μL=0.1 mL；T：反應時(shí)間，1min。