技術(shù)文章/ARTICLES

 ELISA即酶聯(lián)免疫吸附試驗，是一種常用的固相酶免疫測定方法。ELISA的基本原理是：

①使抗原（或抗體）結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性；

②使抗原（或抗體）與某種酶聯(lián)結成酶標抗原（或抗體），而且此酶標抗原（或抗體）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；

③測定時(shí)將受檢標本（抗體或抗原）和酶標抗原（或抗體）按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進(jìn)行反應，再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其它物質(zhì)分開(kāi)，zui后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢的抗體或抗原量成一定比例；再加入酶反應底物后，底物被酶催化后變?yōu)橛猩a(chǎn)物，根據其顏色反應的深淺進(jìn)行定性或定量分析，以了解被測標本中抗體或抗原含量。

    elisa方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在臨床檢驗中除正常反應外，有時(shí)?？梢?jiàn)到一些錯誤結果（即假陽(yáng)性或假陰性結果）。引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有：

①標本因素；

②試劑因素；

③操作因素。

現就標本因素對ELISA測定的影響做如下討論。

    血清是zui常用的ELISA標本，血漿一般可視為與血清同等的標本，標本引起的假陽(yáng)性和假陰性結果主要是干擾性物質(zhì)所致，分為內源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種：

1、內源性物質(zhì) 有人認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測結果。常見(jiàn)的干擾物質(zhì)有：類(lèi)風(fēng)濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫源性誘導的抗鼠Ig (s)抗體、交叉反應物質(zhì)和其它物質(zhì)等。

（1）類(lèi)風(fēng)濕因子

    人血清中IgM、IgG型類(lèi)風(fēng)濕因子（RF）可以與ELISA系統中的捕獲抗體及酶標記二抗的FC段直接結合，從而導致假陽(yáng)性。

解決該情況的辦法是：

①用F(ab)2替代完整的IgG；

②標本用聯(lián)有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效）；

③檢測抗原時(shí)，可以用2-巰基乙醇等加入到標本稀釋液中，使RF降解。

（2）補體 ELISA系統中固相一抗和標記二抗過(guò)程中，抗體分子發(fā)生變構，其FC段的補體C1q分子結合位點(diǎn)被暴露出來(lái)，使C1q 可以將二者連接起來(lái)，從而造成假陽(yáng)性。解決的辦法是：①用EDTA稀釋標本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。

（3）嗜異性抗體 人類(lèi)血清中含有能與嚙齒類(lèi)動(dòng)物（如鼠等）Ig (s) 結合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統中一抗和二抗連接起來(lái)，也能造成假陽(yáng)性。解決的辦法是：可在標本稀釋液中加入過(guò)量的動(dòng)物Ig (s) ，但加入量不足或亞類(lèi)不同時(shí)無(wú)效。

（4）嗜靶抗原的自身抗體 抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時(shí)能與靶抗原結合形成復合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結果。為避免以上情況出現，解決的辦法是：測定前需用理化方法將其解離后再測定。

（5）醫源性誘導的抗鼠Ig (s) 抗體 臨床開(kāi)展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療，用放射性同位素標記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù)，均有可能使這些病人體內產(chǎn)生抗鼠抗體；另外，被鼠等嚙齒類(lèi)動(dòng)物咬傷的病人體內也可以產(chǎn)生抗鼠Ig (s) 抗體。這些病人ELISA測定時(shí)均可產(chǎn)生假陽(yáng)性。解決的辦法是：測定抗原時(shí)，在標本中加入足量的正常鼠Ig (s) ，從而克服由于上述原因造成的假陽(yáng)性。

（6）交叉反應物質(zhì) 類(lèi)地高辛、類(lèi)AFP樣物質(zhì)等，是與靶抗原有交叉反應的物質(zhì)。在用多抗測定抗原時(shí)對測定結果影響不大，但在用單克隆抗體測定抗原時(shí)，如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應的靶決定簇時(shí)，也會(huì )出現假陽(yáng)性結果。

（7）標本中其它成分的影響 血清脂質(zhì)過(guò)高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過(guò)大等，均對ELISA測定結果有干擾作用。