血清是ELISA試劑盒實(shí)驗前的必要標本之一,所以我們在做實(shí)驗前需要對血清有個(gè)充分的了解,我們需要知道血清是怎么儲存的,血清是怎么操作的。
1.血清必須貯存于–20~-70℃,若存放于4℃,請勿超過(guò)一個(gè)月。如果一次無(wú)法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無(wú)菌50ml離心管中,由于血清結凍時(shí)體積會(huì )增加約10%,必須預留此膨脹體積之空間,否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。
2.一般提供之血清為無(wú)菌,不需再無(wú)菌過(guò)濾。若發(fā)現血清有許多懸浮物,則可將血清加入培養基內一起過(guò)濾,勿直接過(guò)濾血清。
3.瓶裝(500ml)血清解凍步驟(逐步解凍法-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天,至室溫下全溶后再分裝,一般以50ml無(wú)菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過(guò)程中須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結而發(fā)生沈淀。
4.heat-inactivation是指56℃,30分鐘加熱已*解凍之血清。加熱過(guò)程中須規則搖晃均勻。此熱處理之目的是使血清中之補體成份(complement)去活化。除非必須,一般不建議作此熱處理,因為會(huì )造成沈淀物之顯著(zhù)增多,且會(huì )影響血清之品質(zhì)。
5.勿將血清置于37℃太久,若在37℃放置太久,血清會(huì )變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩定之成份亦會(huì )因此受到破壞,而影響血清之品質(zhì)。
6.血清之沉淀物
6.1.凝絮物:發(fā)生之原因有許多種,但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein)變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin)造成,這些凝絮沈淀物不會(huì )影響血清本身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沈淀物,可用離心3000rpm,5min去除,或離心后上清液可以加入培養基中一起過(guò)濾。不建議用過(guò)濾步驟去除這些凝絮沈淀物,因為會(huì )阻塞過(guò)濾膜。
6.2.顯微鏡下觀(guān)察之“小黑點(diǎn)":通常經(jīng)過(guò)熱處理之血清,沈淀物的形成會(huì )顯著(zhù)的增多。有些沈淀物在顯微鏡下觀(guān)察像是“小黑點(diǎn)",常會(huì )誤認為血清遭受污染,而將血清放在37℃中欲培養此“微生物“,但在37℃環(huán)境下,又會(huì )使此沈淀物增多,更會(huì )誤認為微生物之增殖,但以培養細菌之培養基檢測,又沒(méi)有污染。一般而言,此小黑點(diǎn)應不會(huì )影響細胞之生長(cháng),但若懷疑此血清之品質(zhì),應立即停用,更換另一批號的血清。
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