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    制備單克隆抗體時(shí)有哪些具體步驟

    點(diǎn)擊次數:358  更新時(shí)間:2023-12-19
    一抗可用于檢測糖尿病、癌癥、阿爾茨海默病和帕金森病的生物標志物。二抗則主要用于檢測和純化抗原蛋白。二抗在標記和檢測方面比較靈敏和靈活。所以,它們在流式細胞術(shù)、蛋白質(zhì)印跡和細胞成像等一系列應用中用于一抗的比色、化學(xué)發(fā)光和熒光檢測。二抗類(lèi)型的選擇基于一抗的類(lèi)別:免疫球蛋白IgG或IgM、標簽類(lèi)型和來(lái)源宿主。
    制備單克隆抗體時(shí)有哪些具體步驟:
    一、免疫動(dòng)物選擇
    根據需要產(chǎn)生目標抗原的免疫反應,選擇合適的免疫動(dòng)物。例如,小鼠是免疫動(dòng)物之一,因其易于操作且在免疫應答方面較為強大。
    二、抗原免疫
    將目標抗原注射到免疫動(dòng)物體內,通常需要多次免疫以激發(fā)免疫反應??梢赃x擇不同的免疫路線(xiàn),如皮下、腹腔、靜脈等。
    三、細胞融合
    從免疫動(dòng)物獲得脾細胞或淋巴細胞,與骨髓瘤細胞或其他癌細胞(如SP2/0、NS0等)融合,形成雜交瘤細胞。融合細胞通常使用(PEG)或電穿孔等方法促進(jìn)細胞融合。
    四、雜交瘤細胞篩選
    對融合細胞進(jìn)行篩選,一般使用HAT選擇性培養基,通過(guò)對非雜交瘤細胞和單克隆雜交瘤細胞的抗代選擇,篩選出產(chǎn)生目標抗體的單克隆雜交瘤細胞。
    五、單克隆抗體生產(chǎn)
    從篩選出的單克隆雜交瘤細胞中獲取單一細胞系,并進(jìn)行大規模培養和產(chǎn)生抗體。一般可采用體外或體內方式。
     
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