鮑皰疹樣病毒(ABV)是一種常見(jiàn)的水生動(dòng)物病原體,可以感染魚(yú)類(lèi)、貝類(lèi)等水生動(dòng)物。ABV感染后會(huì )引起鰓炎、肝臟壞死、皮膚潰瘍等癥狀,嚴重影響水產(chǎn)養殖業(yè)的發(fā)展。因此,快速準確地檢測ABV對于水產(chǎn)養殖業(yè)的健康發(fā)展至關(guān)重要。
PCR技術(shù)是一種高靈敏度、高特異性的核酸檢測方法,已經(jīng)成為檢測ABV的常用方法之一。
鮑皰疹樣病毒PCR試劑盒是一種包含所有所需試劑的套裝,可快速、方便地進(jìn)行PCR反應。
一、組成
通常由PCR反應緩沖液、DNA聚合酶、引物和探針等多種試劑組成。其中,PCR反應緩沖液提供了反應所需的各種離子和化學(xué)物質(zhì),DNA聚合酶則是催化PCR擴增反應的主要酶。引物和探針則是特定待擴增DNA序列的特異性核酸分子。此外,還包括各種質(zhì)控和緩存試劑等。
二、使用方法
將PCR試劑盒中的所有試劑混合后,向樣品中加入一定量的反應液,然后進(jìn)行PCR擴增反應。PCR反應通常包括預變性、擴增和終止三個(gè)階段。預變性階段主要是對樣品進(jìn)行熱變性處理,使DNA單鏈變?yōu)殡p鏈;擴增階段則是通過(guò)引物的特異性作用和DNA聚合酶的催化作用進(jìn)行DNA擴增;終止階段則是通過(guò)升溫至高溫殺死PCR反應中未被利用的DNA聚合酶,從而停止反應。
三、在A(yíng)BV檢測中的應用
在A(yíng)BV檢測中的應用需要針對ABV的基因序列設計特異性引物和探針。目前已有許多研究報道了不同的鮑皰疹樣病毒PCR試劑盒,并且這些試劑盒已被廣泛應用于水產(chǎn)養殖業(yè)中ABV的快速檢測。
另一種基于熒光共振能量轉移(FRET)技術(shù)的鮑皰疹樣病毒PCR試劑盒也被研制出來(lái)。該試劑盒具有高靈敏度和高特異性,可以檢測出10個(gè)拷貝的ABV基因序列。該試劑盒具有高效、快速、準確等優(yōu)點(diǎn),在水產(chǎn)養殖業(yè)中得到了廣泛應用。