植物ELISA試劑盒的實(shí)驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物羥基自由基水平。用純化的植物羥基自由基抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入植物羥基自由基，再與HRP標記的羥基自由基抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。
TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成黃色。顏色的深淺和樣品中的植物羥基自由基呈正相關(guān)。
用酶標儀測定吸光度，通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品中植物羥基自由基濃度。
植物ELISA試劑盒的實(shí)驗操作步驟如下：
1、標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
2、加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6、加酶：每孔加入酶標試劑，空白孔除外。
7、溫育：操作同3。
8、洗滌：操作同5。
9、顯色：每孔先加入顯色劑，再加入顯色劑B，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。
10、終止：每孔加終止液，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。
11、測定：以空白空調零，依序測量各孔的吸光度（OD值），測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。
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