傘枝梨頭霉PCR試劑盒采用優(yōu)化的超順磁性磁珠和緩沖體系,可便捷回收PCR產(chǎn)物中的DNA,有效去除引物二聚體、dNTP、無(wú)機鹽及蛋白質(zhì)等雜質(zhì),整個(gè)過(guò)程操作簡(jiǎn)單快速,20分鐘即可完成實(shí)驗。本產(chǎn)品具有回收DNA的片段,回收率高,DNA純度高等特點(diǎn),回收的DNA可直接用于酶切、測序、PCR等后續操作。
傘枝梨頭霉PCR試劑盒的樣品DNA的制備:
1、用自選方法純化樣品的DNA,本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數核酸純化產(chǎn)品兼容。
2、如果有N個(gè)樣品,則需要進(jìn)行N+2個(gè)樣品提取,多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對照管。
3、配制溶液A工作液。如果待測樣品數量為其他數字,配制的溶液A工作液的體積需要做相應的調整。
4、在標記好的N+2個(gè)離心管中,加入1-5mg固體樣品(半粒芝麻大?。┗?uL液體樣品待測樣品。在樣品制備陽(yáng)性對照中加入5uL陽(yáng)性對照,在樣品制備陰性對照中加入5uL水。
5、在每個(gè)管中加入100uL溶液A工作液,確保固體樣品被溶液淹埋,如果是液體樣品則震蕩混勻。
6、95℃保溫10分鐘。
7、待冷卻到常溫后加入10uL溶液B并混勻得DNA釋放液。每個(gè)樣品得到的DNA釋放液足夠進(jìn)行50-100次PCR。
本試劑盒用于病料組織中病毒的檢測,具有與柱提取方法相當的敏感性,且用本試劑盒可免除組織研磨和核酸提取步驟,加快檢測流程,加大檢測能力,減少實(shí)驗室污染。前期研究結果顯示,對于動(dòng)物各內臟、耳、尾等組織,均不需要研磨而直接裂解。也可以對含有骨髓的骨組織,直接用試劑盒處理和擴增。