PCR檢測試劑盒利用離心柱內硅基質(zhì)膜提取豬偽狂犬病毒DNA，以此為模板，在特異引物和TaqDNA聚合酶的作用下，經(jīng)高溫變性，低溫退火、中溫延伸的循環(huán)，使特異的DNA的片段拷貝數放大一倍。經(jīng)過(guò)30次循環(huán)，使擴增的DNA的片段放大數百萬(wàn)倍。將擴增的DNA的片段進(jìn)行電泳，經(jīng)染色后在紫外燈照射下，肉眼可見(jiàn)DNA的片段的擴增帶，進(jìn)而判斷待檢樣本中是否含有豬偽狂犬病毒。
PCR檢測試劑盒具有下列特點(diǎn)：
1.根據DHBV的保守序列設計的引物，與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應。
2.靈敏度比常規PCR高2-3個(gè)數量級，可以達到幾百拷貝/反應。
3.即開(kāi)即用，用戶(hù)只需要提供樣品模板，操作簡(jiǎn)單，定量準確快速。
4.一管式熒光定量PCR檢測，避免后續污染。
5.足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
PCR檢測試劑盒的檢測步驟：
1.核酸提取
樣品進(jìn)行適當處理后，可采用核酸提取試劑盒，該試劑盒可用于對樣本中病毒RNA的提取，請按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。也可選擇其他合適的商品化產(chǎn)品。
2.擴增試劑的準備
將各試劑按照用量加入無(wú)菌離心管中，充分混勻，短暫離心后在PCR反應管中分別加入18μL混合液。
3.加樣
將制備好的樣本，陰性對照，陽(yáng)性對照各取2μL分別加入對應反應管中，加完后蓋緊PCR反應管蓋，置于PCR儀上。
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