麻疹病毒PCR檢測試劑盒準備試劑與收集血樣:
雙重核酸試劑盒(熒光PCR法) 1. 收集標本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時(shí);更長(cháng)時(shí)間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反復凍融。
2. 標準品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管,管加標本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復作對倍稀釋?zhuān)瑥牡谄?管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3. 10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋?zhuān)?示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ,置 37 ℃ 暗處反應15 分鐘。
8. 每孔加入100ul 終止液混勻。
9. 30分鐘內用酶標儀在 45 0 nm 處測 吸光值。
試劑使用須知:
(1)請參照相關(guān)法規、文獻、MSDS等信息,理解并掌握好試劑的特性,再進(jìn)行安全操作。
(2)通常購買(mǎi)試劑時(shí)一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的話(huà),更加注意其他保管和管理。
(3)萬(wàn)一試劑操作者并非專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員。必須在專(zhuān)業(yè)人士的指導監督下進(jìn)行操作。對于使用后的廢棄物,不要或者舊的試劑,應按照相關(guān)法律法規正當處理。
(4)購買(mǎi)后,請務(wù)必確認標簽上的注意事項;做好預防顛倒,摔壞的措施和管理體制;在使用前再次確認標簽上的注意事項,做好必要的安全對策;對沒(méi)有標明其危害特性、有害特性的,也要慎重地進(jìn)行操作;必須帶好防護用具,小心翼翼進(jìn)行操作。
© 2024 上海一研生物科技有限公司版權所有 滬ICP備14030958號-14 管理登陸 技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng) GoogleSitemap