技術(shù)文章/ARTICLES

    在競爭法維生素B6檢測試劑盒中，陰性孔呈色深于陽(yáng)性孔。陰性呈色的強度取決于反應中酶結合物的濃度和加入競爭抑制物的量，一般調節陰性對照的吸光度在1.0-1.5之間，此時(shí)反應為敏感。

    競爭法ELISA不易用自視判斷結果，因肉眼很難辨別弱陽(yáng)性反應與陰性對照的顯色差異，一般均用比色計測定，讀出S、P和N的吸光值。計算方法主要也有兩種，即陽(yáng)性判定值法和抑制率法。

a. 抑制率法 

    抑制率表示標本在競爭結合中標本對陰性反應顯色的抑制程度，按下式計算：

    抑制率（%）= ELISA試劑盒（陰性對照A值-標本A值）×100%/陰性對照A值，一般規定抑制率≥50%為陽(yáng)性，＜50%為陰性。

b. 陽(yáng)性判定值法

    與間接法和夾心法中的陽(yáng)性判定值法基本相同，ELISA試劑盒但在計算公式中引入陽(yáng)性對照A值，現舉某種檢測抗HBc的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照為不含抗HBc的復鈣人血漿，陽(yáng)性對照中抗HBc含量為125±100u/ml。每次試驗設2個(gè)陽(yáng)性對照和3個(gè)陰性對照。測得A值后，先計算陰性對照A值的平均值（NCX）和陽(yáng)性對照A值的平均數（PCX），兩個(gè)平均數的差（N-P）必須大于一個(gè)特定的數值（例如0.300）,試驗才有效。3個(gè)陰性對照A值均應小于2.000，而且應≥0.5×NCX并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而以另2個(gè)陰性對照重新計算×NCX；如有2個(gè)陰性對照A超出以上范圍，則該次實(shí)驗無(wú)效。陽(yáng)性判定值按下式計算：陰性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX，標本A值≤陽(yáng)性判定值的反應為陽(yáng)性，A＞陽(yáng)性判定值的反應為陰性。