傘枝梨頭霉PCR試劑盒是指將RNA 的反轉錄和cDNA 的聚合酶鏈式擴增相結合的技術(shù)。利用逆轉錄酶將RNA逆轉錄成cDNA,再以cDNA 為模板,擴增合成目的片段。PCR試劑盒的常見(jiàn)應用包括基因檢測、轉錄物變異檢測,以及克隆和測序用cDNA模板制備。
傘枝梨頭霉PCR試劑盒的低溫存法:
①簡(jiǎn)單保存法,將瓊脂斜面孢子培養物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養物置于4℃冰箱保存,保存時(shí)間不超過(guò)1~2個(gè)月,若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時(shí)間可達3~4個(gè)月;
②液氮超低溫保存法,將生長(cháng)穩定期的細胞懸浮在10%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中,密封于安瓿管內,然后控制冷卻速度,使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時(shí),即可置于-150~-196℃的液氮罐中保存。大多數微生物如病毒、噬菌體、多種細菌、放線(xiàn)菌、酵母和原蟲(chóng)、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物,都可用此法長(cháng)期保存。
傘枝梨頭霉PCR試劑盒的脫水存法:
①沙土保存法,能產(chǎn)孢子的細菌、放線(xiàn)菌及霉菌可采用此法保存,即將沙和土以3:2比例混合,經(jīng)稀酸處理洗凈過(guò)篩,裝入小試管內,裝置高度為1cm;滅菌2~3次,烘干后即可將在斜面培養基上生長(cháng)良好的孢子,用無(wú)菌蒸餾水2~2.5ml制成孢子懸液,吸取少許加入沙土管中,經(jīng)真空抽干,外觀(guān)呈松散狀態(tài),于4℃冰箱保存,保存期可達5~7年。
② 冷凍干燥法,將孢子懸浮液與保護劑(一般用脫脂牛奶或血清)相混合,放在安瓿管內于-20~-30℃的乙醇浴中速凍。然后,在低溫下用真空泵抽干,并用五氧化二磷或干冰使水汽結凍,熔封安瓿管,于低溫下保存。保存期可達5~10年之久。
③ 石蠟油封存法,在斜面菌種培養物上,倒上滅菌后的石蠟油,高出斜面1cm,于4℃冰箱或低溫干燥處保存,此法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物,保存期為一年以上。