原代上皮細胞培養體系

原代上皮細胞培養體系是一個(gè)為體外生長(cháng)的人、大鼠、小鼠、兔等哺乳動(dòng)物的柱狀上皮細胞設計的理想的培養基方案。本體系是一個(gè)基于碳酸氫鹽的緩沖體系，可以在孵育的5%的CO2的氣體環(huán)境下維持一個(gè)圍繞pH7.2的酸堿緩沖體系。本體系是一個(gè)無(wú)菌的液體混合系統，其中包含必須和非必須氨基酸、維生素、激素、生長(cháng)因子、微量元素和一些其他的有機和無(wú)機化合物以及胎牛血清（6%）。本培養體系是基于固定配方配制的液態(tài)培養體系，可以為體外培養的人、大鼠、小鼠、兔等哺乳動(dòng)物的柱狀上皮細胞提供一個(gè)確定適宜的平衡營(yíng)養環(huán)境，并且可以選擇性的促進(jìn)柱狀上皮細胞的擴增。

運輸

放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運輸

保存方法

基礎培養基2℃～8℃，培養添加劑 -20℃，避光，保存12個(gè)月。配置好的培養基2℃～8℃保存1-2個(gè)月。

體系組成

產(chǎn)品使用

1） 本產(chǎn)品僅能用于科研

2） 本產(chǎn)品未通過(guò)直接用于活體動(dòng)物和人的審核

3） 本產(chǎn)品未通過(guò)用于活體診斷的審核

注意事項

1、收到產(chǎn)品請先檢查包裝是否完好，如有破損，漏液、渾濁等現象請及時(shí)聯(lián)系我們，培養基凍融后，可能會(huì )有少量絮狀物析出，不影響產(chǎn)品正常使用。

2、請仔細閱讀產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)，了解產(chǎn)品使用方法、保存方式、有效期等信息，若因操作失誤，保存不當而導致產(chǎn)品出現污染等問(wèn)題的，責任由客戶(hù)自行承擔。

3、本產(chǎn)品僅能用于科研，培養基中的一些組分對人體有較低的危害性，如有接觸立即用大量清水沖洗即可。

注意事項：

（1）無(wú)菌操作：細菌或霉菌污染是培養失敗的常見(jiàn)原因，必須加強各個(gè)環(huán)節的無(wú)菌操作觀(guān)念，以預防為主，一旦污染，一般很難消除。

（2）培養液：所用的培養液必須滿(mǎn)足細胞生存和生長(cháng)的必要條件。由于細胞來(lái)源的動(dòng)物種類(lèi)、組織類(lèi)型不同，對培養液的要求有一定的差異，必要時(shí)可用預實(shí)驗的方法選擇適當的培養液。

（3）胎牛血清：胎牛血清對于維持培養細胞的生存和促進(jìn)細胞增殖起著(zhù)關(guān)鍵性作用?？蛇x擇多種不同批號的胎牛血清進(jìn)行小樣分析。一旦確定某一廠(chǎng)家的某一批號胎牛血清后，就保持應用至實(shí)驗完成。想了解血清的秘密，可以參考Nothing：關(guān)于血清，你不知道的太多了

（4）：必須新鮮配制，貯存時(shí)間過(guò)長(cháng)(即使是-20℃低溫保存)，也將影響消化效力，導致消化時(shí)間過(guò)長(cháng)，細胞損傷增加。

（5）L-幾乎所有細胞對有較高的要求，細胞需要核酸和蛋白質(zhì)，在缺時(shí)，細胞會(huì )因生長(cháng)不良而死亡。液中很不穩定，加有養液在4℃冰箱貯存兩周以上時(shí)，就應重新加入原來(lái)量的

（6）靜置培養：原代細胞在消化分離后，置于CO2培養箱的頭24～48h (必要時(shí)72h)內，應處于絕對靜置狀態(tài)，切忌不時(shí)地取出培養瓶觀(guān)察生長(cháng)狀況，這將使原代分離細胞難以貼壁，更談不上伸展和增殖，初學(xué)者尤應注意。不必擔心培養液中的營(yíng)養成分會(huì )消耗光，在細胞增殖之前對營(yíng)養的要求并不大。原代培養初期僅加一薄層培養液的目的也在于有利于細胞貼壁伸展。

（7）消化時(shí)間：一般消化至肉眼尚可見(jiàn)微小組織顆粒即可，因為此時(shí)組織顆粒已經(jīng)松散，略經(jīng)吹打即成細胞團或單個(gè)細胞，過(guò)久的消化往往導致細胞損傷加重，細胞培養成活率降低。

（8）其他生長(cháng)因子：經(jīng)過(guò)以上處理，一般原代分離細胞培養均可以成功。對于少數特殊類(lèi)型細胞也可以考慮加一些特殊的生長(cháng)因子，如胰島素能促使細胞攝取葡萄糖和氨基酸。另外，內毒素、EGF、FGF等均有促有絲分裂作用，但費用較高。

細胞培養最初認識：

什么是細胞培養？ 細胞培養是指將細胞從動(dòng)物或植物體內取出，然后在適宜的人工環(huán)境中生長(cháng)的過(guò)程。細胞可以在培養前直接從組織中取出并通過(guò)酶或機械方法進(jìn)行解離，也可以來(lái)源于已建立的細胞系或細胞株。

原代培養：

原代培養是指細胞從組織中分離出來(lái)后，在適宜條件下增殖，直到它們占據所有可用的基質(zhì)（即達到匯合狀態(tài)）的培養階段。在此階段，必須通過(guò)將細胞轉移到含有新鮮生長(cháng)培養基的新容器中進(jìn)行繼代培養（即傳代），以為其提供更多的繼續生長(cháng)空間。

細胞系：

第一次傳代培養后，原代培養物即被稱(chēng)為細胞系。來(lái)自于原代培養的細胞系壽命有限（即：有限細胞系），隨著(zhù)細胞的傳代，生長(cháng)能力的細胞會(huì )占據優(yōu)勢，最終導致細胞群體在基因型和表型上達到一定程度的均一性。

細胞株：

如果通過(guò)克隆或其他方法從培養物中陽(yáng)性篩選出了細胞系的亞群，則該細胞系成為一個(gè)細胞株。與親代細胞系起始時(shí)相比，細胞株通常會(huì )獲得一些其他的遺傳學(xué)改變。

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原代上皮細胞培養體系總RNA提取試劑盒(RNApure+仿)   Total RNA Exaction Kit (RNApure+ )

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