DMEM 培養基

DMEM是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養基，是在MEM培養基的基礎上研制的。與MEM比較增加了各種成分用量，同時(shí)又分為高糖型（4500mg/L）和低糖型(1000mg/L)。

DMEM是 dulbecco's modified eagle medium的縮寫(xiě)，所以其特點(diǎn)主要包括以下：

（1）氨基酸含量為依格爾培養基的2倍，且含有非必需氨基酸，如；

（2）維生素含量為依格爾培養基的4倍；

（3）含有糖酵解途徑中的重要物質(zhì)——丙酮酸；

（4）含有微量的鐵離子。

注意事項：

（1）無(wú)菌操作：細菌或霉菌污染是培養失敗的常見(jiàn)原因，必須加強各個(gè)環(huán)節的無(wú)菌操作觀(guān)念，以預防為主，一旦污染，一般很難消除。

（2）培養液：所用的培養液必須滿(mǎn)足細胞生存和生長(cháng)的必要條件。由于細胞來(lái)源的動(dòng)物種類(lèi)、組織類(lèi)型不同，對培養液的要求有一定的差異，必要時(shí)可用預實(shí)驗的方法選擇適當的培養液。

（3）胎牛血清：胎牛血清對于維持培養細胞的生存和促進(jìn)細胞增殖起著(zhù)關(guān)鍵性作用?？蛇x擇多種不同批號的胎牛血清進(jìn)行小樣分析。一旦確定某一廠(chǎng)家的某一批號胎牛血清后，就保持應用至實(shí)驗完成。想了解血清的秘密，可以參考Nothing：關(guān)于血清，你不知道的太多了

（4）：必須新鮮配制，貯存時(shí)間過(guò)長(cháng)(即使是-20℃低溫保存)，也將影響消化效力，導致消化時(shí)間過(guò)長(cháng)，細胞損傷增加。

（5）L-幾乎所有細胞對有較高的要求，細胞需要核酸和蛋白質(zhì)，在缺時(shí)，細胞會(huì )因生長(cháng)不良而死亡。液中很不穩定，加有養液在4℃冰箱貯存兩周以上時(shí)，就應重新加入原來(lái)量的

（6）靜置培養：原代細胞在消化分離后，置于CO2培養箱的頭24～48h (必要時(shí)72h)內，應處于絕對靜置狀態(tài)，切忌不時(shí)地取出培養瓶觀(guān)察生長(cháng)狀況，這將使原代分離細胞難以貼壁，更談不上伸展和增殖，初學(xué)者尤應注意。不必擔心培養液中的營(yíng)養成分會(huì )消耗光，在細胞增殖之前對營(yíng)養的要求并不大。原代培養初期僅加一薄層培養液的目的也在于有利于細胞貼壁伸展。

（7）消化時(shí)間：一般消化至肉眼尚可見(jiàn)微小組織顆粒即可，因為此時(shí)組織顆粒已經(jīng)松散，略經(jīng)吹打即成細胞團或單個(gè)細胞，過(guò)久的消化往往導致細胞損傷加重，細胞培養成活率降低。

（8）其他生長(cháng)因子：經(jīng)過(guò)以上處理，一般原代分離細胞培養均可以成功。對于少數特殊類(lèi)型細胞也可以考慮加一些特殊的生長(cháng)因子，如胰島素能促使細胞攝取葡萄糖和氨基酸。另外，內毒素、EGF、FGF等均有促有絲分裂作用，但費用較高。

細胞培養最初認識：

什么是細胞培養？ 細胞培養是指將細胞從動(dòng)物或植物體內取出，然后在適宜的人工環(huán)境中生長(cháng)的過(guò)程。細胞可以在培養前直接從組織中取出并通過(guò)酶或機械方法進(jìn)行解離，也可以來(lái)源于已建立的細胞系或細胞株。

原代培養：

原代培養是指細胞從組織中分離出來(lái)后，在適宜條件下增殖，直到它們占據所有可用的基質(zhì)（即達到匯合狀態(tài)）的培養階段。在此階段，必須通過(guò)將細胞轉移到含有新鮮生長(cháng)培養基的新容器中進(jìn)行繼代培養（即傳代），以為其提供更多的繼續生長(cháng)空間。

細胞系：

第一次傳代培養后，原代培養物即被稱(chēng)為細胞系。來(lái)自于原代培養的細胞系壽命有限（即：有限細胞系），隨著(zhù)細胞的傳代，生長(cháng)能力的細胞會(huì )占據優(yōu)勢，最終導致細胞群體在基因型和表型上達到一定程度的均一性。

細胞株：

如果通過(guò)克隆或其他方法從培養物中陽(yáng)性篩選出了細胞系的亞群，則該細胞系成為一個(gè)細胞株。與親代細胞系起始時(shí)相比，細胞株通常會(huì )獲得一些其他的遺傳學(xué)改變。

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