原代細胞的分離培養：

原代培養即直接從有機體取下細胞、組織或器官，讓它們在體外維持與生長(cháng)。原代培養的特點(diǎn)是細胞或組織剛離開(kāi)機體，它們的生物性狀尚未發(fā)生很大的改變，在一定程度上可反映它們在體內的狀態(tài)，表現出來(lái)源組織或細胞的特性， 因此用于藥物實(shí)驗，尤其是藥物對細胞活動(dòng)、結構、代謝、有無(wú)毒性或殺傷作用等，是的工具。常用的原代培養法有組織塊培養法和消化培養法。

（一）組織塊培養法

許多實(shí)驗室喜歡用組織塊培養法進(jìn)行原代培養，因為方法簡(jiǎn)單，細胞也較容易生長(cháng)。尤其是培養心肌，有時(shí)還可觀(guān)察到心肌組織塊搏動(dòng)。細胞從組織塊邊緣向外長(cháng)出并鋪滿(mǎn)培養皿或培養瓶后， 即可進(jìn)行傳代。

1. 設備材料

培養箱、冰箱、超凈工作臺／無(wú)菌間、無(wú)菌吸管、離心管、酒精燈、試管架、培養瓶、培養皿、消化液、基礎培養液、胎牛血清、Hanks 溶液、雙抗試液、剪刀、攝子、小燒杯。

2. 操作步驟

（1） 在無(wú)菌條件下，取待培養的組織適量，置入小燒杯中， 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉組織塊表面的血污。

（2）用眼科剪將組織塊反復剪成0.5~ 1mm3的小塊。

（3）再用Hanks 溶液反復漂洗， 直至液體不混濁為止。等組織塊下沉，將燒杯傾斜，用小吸管盡量吸除Hanks 溶液。

（4）用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml、200μg/ml）的培養液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培養液。

（5）用彎頭吸管吸取組織小塊，均勻地置于培養皿內表面，吸去多余的培養液，各組織小塊之間相距0.5cm 為宜。蓋好培養皿蓋，做好標記， 置37°C 的CO2培養箱內。

（6） 2~4h 后，于超凈工作臺中，緩緩地向培養皿中加入上述含20％血清及雙抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml ）的培養液少量，以使組織塊浸沒(méi)在培養液中。

（7）輕輕地將培養皿及組織塊移至CO2 培養箱， 如無(wú)特殊情況，不必觀(guān)察。1~2 周后，可觀(guān)察到細胞從組織塊邊緣長(cháng)出，形成生長(cháng)暈。

（9） 一般說(shuō)來(lái)，若培養液無(wú)明顯改變， 1 周換液1 次即可。待細胞長(cháng)滿(mǎn)整個(gè)培養皿內表面，即可進(jìn)行傳代培養。

大鼠椎間盤(pán)髓核細胞

細胞基本屬性：

質(zhì)量檢測：Ⅱ型膠原(Collagen Ⅱ)免疫熒光染色為陽(yáng)性，純度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等

產(chǎn)品規格：5x105cells/T25或1mL凍存管

培養基：大鼠椎間盤(pán)髓核細胞培養基

培養條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

換液頻率：每3-4天換液一次

消化液：0.25%

產(chǎn)品貨期現貨，1周左右

運輸方式T25培養瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應限制僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類(lèi)疾病的治療產(chǎn)品使用

背景介紹：

公司正在出售的產(chǎn)品：

血管緊張素1轉換酶抑制劑抗體

體液鈣（CALPAIN）活性熒光定量檢測試劑盒

組蛋白H3-K27（mono/di/tri）甲基化檢測試劑盒

人體RUNX3（AML-2）基因引物對

冰凍切片組織MAPK蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒

通用型甘薯黑斑?。?span>Ceratocystis fimbriata）基因檢測試劑盒

體液總乳酸比色法定量檢測試劑盒

細菌鎂離子濃度化學(xué)比色法定量檢測試劑盒

纖維蛋白溶酶原激活劑抑制物（PAI）活性熒光定量檢測試劑盒

體液氧化型甘肽（GSSG）濃度高效液相色譜定量檢測試劑盒

質(zhì)粒/蛋白制備樣品內毒素比色法定量檢測試劑盒

BCL2蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒

琥珀酸待測樣品處理試劑盒

組蛋白H3-K23乙?；瘷z測試劑盒

組織PKG-I激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）

CHROMOMYCIN A3細胞核形態(tài)染色試劑盒

中期因子/肝素結合生長(cháng)因子抗體

谷受體相互作用蛋白2抗體

溶質(zhì)載體家族10成員5抗體

MARCKS樣蛋白1抗體

細胞周期蛋白1結合蛋白抗體

氨肽酶A抗體

磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體

大鼠椎間盤(pán)髓核細胞CD174抗體

操作方法：

組織塊直接培養法（原代細胞培養實(shí)驗）

材料與儀器

【動(dòng)物】選擇大約一半足孕時(shí)間的胚胎，10－13天齡胚胎含有最大數量的未分化的間質(zhì)細胞，成纖維細胞可從這些細胞衍生獲得。每組小鼠胚胎1個(gè)【實(shí)驗材料】每組的超凈臺中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml 0.25%瓶；PBS(-)1瓶2.100ml滅菌燒杯2個(gè)；3、50ml離心筒2個(gè)4、滅菌培養皿1個(gè)，細胞培養瓶1個(gè)5、1ml，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)6、細胞計數板1塊；7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；8、酒精燈1臺；

步驟

1) 胚胎的分離。適用哺乳動(dòng)物(倉鼠、小鼠和大鼠)2)將1－2個(gè)胚胎轉移至一個(gè)小的無(wú)菌培養皿中，用新的無(wú)菌剪刀小心地絞碎胚胎，用PBS漂洗。3)在無(wú)菌狀態(tài)下，將絞碎的胚胎轉移于一50ml的無(wú)菌離心筒中,加入40ml 0.25％的無(wú)菌,用攪拌棒輕輕攪動(dòng)。4)在溫暖的環(huán)境中或置于37°C培養箱中輕輕搖動(dòng)15分鐘。5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降，將含有懸浮細胞的液體轉移至一無(wú)菌50ml的離心管中，該管內按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,。6)加人新鮮溶液(見(jiàn)前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來(lái)的50ml離心筒中，重復步驟4和5。7)離心混合的細胞懸液，1200r/rain，5分鐘，棄上清。8)用新鮮的無(wú)菌PBS重懸沉淀的細胞，按步驟7再次離心。9)用PBS反復洗滌細胞直至上清清亮為止。