原理：

采用雙抗體夾心法測定MTHFD2水平。用純化的MTHFD2抗體包被微孔板，制成固相載體，實(shí)驗時(shí)依次在微孔板中加入樣本及標準品，并加入 HRP 標記的 ABP 抗體，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，反復洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在過(guò)氧化物酶的催化下轉化為藍色，再用硫酸終止反應，轉變成黃色。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關(guān)。采用酶標儀在 450nm 波長(cháng)測定吸光度（OD 值），根據標準曲線(xiàn)，計算測試樣品中 ABP 濃度。

性能:

1. 靈敏度：最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線(xiàn)性。樣品線(xiàn)性回歸與預期濃度相關(guān)系數R值為0.990。

2. 特異性：不與其它細胞因子反應。

3. 重復性：板內、板間變異系數均小于10%。

Human  lymphocyte factor Elisa試劑盒

本試劑僅供研究使用  標本：血清或血漿及相關(guān)液體

試劑盒組成；

結果判斷與分析:

1、儀器值：于波長(cháng)450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的待測物質(zhì)標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線(xiàn)，樣品的待測物質(zhì)含量可根據其OD值由標準曲線(xiàn)換算出相應的濃度。

ELISA試劑盒為什么要嚴格按照說(shuō)明書(shū)操作？

一.先說(shuō)最嚴重的操作錯誤，看錯或壓根不看試劑盒配套說(shuō)明書(shū)，不按操作步驟加樣。比如把競爭法的試劑盒當作雙抗體夾心法來(lái)做，導致的結果就是整板顯示很強的藍色，無(wú)任何梯度。

二.混用別的試劑盒里的試劑。不同廠(chǎng)家或者相同廠(chǎng)家的不同試劑盒，所含的試劑成分很可能是不一樣的，混用導致的結果是，浪費珍貴的樣本，樣品的回收率達不到預期值，如果混用不同試劑盒的酶復合物，會(huì )導致顯色過(guò)弱或過(guò)強，因為每種試劑盒所用酶復合物效價(jià)可能不一樣。

三.不看文獻或者不做預實(shí)驗。比如某個(gè)試劑盒按照其靈敏度范圍和文獻報道推算樣本應該1:10稀釋?zhuān)Y果稀釋成1:1000，導致的結果是顯色過(guò)弱，結果不可用。

車(chē).不校準移液器及培養箱的溫度濕度。導致工作試劑濃度不準確，孵育溫度不合適，實(shí)驗帶來(lái)誤差。

五.洗滌不充分，每孔洗液加樣過(guò)少，或者殘留。導致的結果是顯色過(guò)快，同時(shí)背景較高。

六.手洗板時(shí)所用槍頭沒(méi)有懸空加入洗液，導致洗液污染，整個(gè)實(shí)驗失敗。

七.剩余酶標板條未及時(shí)放入干燥袋，導致酶標板受潮，下一次再做時(shí)，顯色過(guò)弱或污染，CV值過(guò)高。

八.試劑盒保存條件不當。試劑盒要求放4℃的，放在了-20℃?；蛘咭蠓?20℃的，放在了4℃。均會(huì )導致試劑盒敏感性下降。

以上只是最常見(jiàn)的操作錯誤。順利完成一次ELISA實(shí)驗需要注意的細節很多，許多操作環(huán)節都影響到檢測的質(zhì)量。

操作步驟：

1. 取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘。

2. 分組：取出 96 孔板，根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數，把剩余的板條繼續冷藏處理。分別設標準

品組（6 個(gè)濃度）、空白孔、待測樣品組。

注：為減少實(shí)驗誤差，保證準確性，建議設置復孔。

3. 加樣：依照標準品的順序分別加入 50ul 的標準品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入 50ul 的蒸餾水；其余微孔中加入 50ul

的待測樣本。

4. 加酶標溶液：標準品組、待測樣本組各孔中加入 100ul 的酶標溶液（空白對照孔除外）。

5. 溫育：酶標板用封板紙密封后，放入濕盒內于 37℃恒溫孵育 1 小時(shí)。

6. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿(mǎn)每孔，靜置 15-30s，充分清洗酶標板 5 次，用吸水紙拍干。

7. 顯色：各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后，再加入顯色劑 B 液 50ul。

8. 終止：25-37℃下避光反應 10-15 分鐘，加入 50ul 終止液。

9. 讀板：在 450nm 波長(cháng)讀取各孔的 OD 值。

公司正在出售的產(chǎn)品：