注意事項:
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設立一個(gè)的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。產(chǎn)品僅用于科研操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
參數規格:
產(chǎn)品名稱(chēng):同病毒綿羊膿皰病毒PCR檢測試劑盒
英文名稱(chēng):Ovine Ecthyma Virus(Orf)PCR
產(chǎn)品規格:50T
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據保守區設計引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
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PCR實(shí)驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,產(chǎn)品僅用于科研按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線(xiàn)放線(xiàn)桿菌探針?lè )晒舛縋CR試劑盒結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實(shí)驗步驟:
產(chǎn)品僅用于科研典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應組成一個(gè)循環(huán),通過(guò)多次循環(huán)反應,使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是:
將待擴增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復性溫度下分別與目的基因兩側的兩條單鏈互補結合,兩個(gè)引物在模板上結合的位置決定了擴增片段的長(cháng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補鏈。
同病毒綿羊膿皰病毒PCR檢測試劑盒原理是由一對引物介導,能在動(dòng)植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
9-芴其他名稱(chēng): 芴;亞聯(lián)基甲;9H-芴-9-;芴氧;二并五環(huán);9-側氧茀英文名稱(chēng): 9-Fluorenone其他名稱(chēng): Fluorene ketone;Diphenylene ketone;9-Oxofluorene;Ketofluorene;Fluorenone產(chǎn)品規格: BR,98%包裝:25克/100克/500克CAS號:486-25-9
2-乙中文名稱(chēng): 2-乙其他名稱(chēng): 鄰乙英文名稱(chēng): 2'-Fluoroacetophenone其他名稱(chēng): 1-(2-Fluorophenyl)ethanone產(chǎn)品規格: 特純,97%包裝:5克/25克/100克/500克
α-紫羅其他名稱(chēng): 甲位紫羅蘭;alpha-紫羅蘭;4-(2,6,6-*基-2-環(huán)己烯基-1-基)-3-丁烯-2-;α-紫羅蘭香;α-芷香;α-呫辛英文名稱(chēng): α-Ionone其他名稱(chēng): alpha-Jonone;4-(2,6,6-Trimethyl-2-cyclohexen-1-yl)-3-buten-2-one產(chǎn)品規格: BR,90%包裝:100克/500克CAS號:127-41-3
4-甲氧基乙英文名稱(chēng): 4-Methoxyacetophenone其他名稱(chēng): p-Acetoanisole;4-Acetylanisole;Acetanisol產(chǎn)品規格: CP,98%包裝:100克/500克/1公斤CAS號:100-06-1C9H10O2=150.18
1-甲基-2-吡咯英文名稱(chēng): NMP其他名稱(chēng): 1-Methyl-2-pyrrolidinone;1-Methyl-2-pyrrolidone;N-Methyl-2-pyrrolidone;M-PYROL產(chǎn)品規格: AR,99%包裝:500毫升CAS號:872-50-4C5H9NO=99.13
α-萘黃其他名稱(chēng): 7,8-并黃;并黃素;萘黃;2-基-7,8-并色英文名稱(chēng): α-Naphthoflavone其他名稱(chēng): 7,8-Benzoflavone;2-Phenyl-4H-naphtho[1,2-b]pyran-4-one;Benzo[h]flavone產(chǎn)品規格: GR,97%包裝:1克/5克CAS號:604-59-1
4-硝基乙英文名稱(chēng): 4-Nitroacetophenone其他名稱(chēng): p-Nitroacetophenone;1-(4-Nitrophenyl)ethanone產(chǎn)品規格: CP包裝:25克/100克/500克CAS號:100-19-6C8H7NO3=165.15
2-壬其他名稱(chēng): 甲基庚基甲;甲基庚甲;甲基庚基;2-基壬;甲庚英文名稱(chēng): 2-Nonanone其他名稱(chēng): 2-Ketononane;Methylheptylketone;Heptyl methyl ketone產(chǎn)品規格: GR,98%包裝:25毫升/100毫升/500毫升CAS號:821-55-6
同病毒綿羊膿皰病毒PCR檢測試劑盒3,4-Dimethylbenzophenone 質(zhì)量規格:效價(jià)測定
N-Boc-L-Histidine 質(zhì)量規格:效價(jià)測定
CINNAMYL FORMATE 質(zhì)量規格:效價(jià)測定
Vaseline 質(zhì)量規格:>98%,BR
Costus oil 質(zhì)量規格:HPLC≥97%,標準品
Isoliquiritigenin 質(zhì)量規格:HPLC≥98%,標準品
N-(Tris(hydroxymethyl)methyl)-2-aminoethanesulfonic acid sodium salt 質(zhì)量規格:檢查
4-NITROTHIOANISOLE 質(zhì)量規格:HPLC法有關(guān)物質(zhì)檢查
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