技術(shù)文章/ARTICLES

    多數(shù)細(xì)胞系和原代細(xì)胞都會(huì)以一種單層的形式生長(zhǎng)（單層細(xì)胞）或者覆蓋在玻璃或經(jīng)處理的塑料物體表面。為了保持細(xì)胞的健康與活躍增殖，通常需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行有規(guī)律的傳代。

    zui常見(jiàn)的傳代方法是使用蛋白酶如胰酶或膠原酶破壞細(xì)胞間以及細(xì)胞與培養(yǎng)介質(zhì)間的連接。當(dāng)細(xì)胞被解離成單細(xì)胞懸液時(shí)，再將它們稀釋并分發(fā)至新的培養(yǎng)容器中。在那里，細(xì)胞可以重新貼壁生長(zhǎng)和分裂，然后經(jīng)過(guò)一段時(shí)間培養(yǎng)，細(xì)胞又再一次長(zhǎng)滿（接近匯合）。此時(shí)，細(xì)胞又需要進(jìn)行傳代或用于下游實(shí)驗(yàn)。

    注意：以下指南描述了典型單層細(xì)胞的常規(guī)傳代與維持的基本原則。為了得到一致的結(jié)果，堅(jiān)持良好的培養(yǎng)記錄非常重要，記錄應(yīng)包括細(xì)胞傳代的日期和傳代的次數(shù)。

    細(xì)胞的檢查：應(yīng)該養(yǎng)成良好的習(xí)慣對(duì)細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)的和認(rèn)真的檢查，以了解它們的狀態(tài)和健康情況。

    首先，用肉眼檢查培養(yǎng)容器中是否存在可見(jiàn)的微生物污染，比如培養(yǎng)基pH改變、渾濁或有顆粒樣的物體。同時(shí)也要注意觀察有沒(méi)有小的真菌菌落，因?yàn)樗鼈冊(cè)陲@微鏡下不易被發(fā)現(xiàn)。這些菌落可能會(huì)飄浮在液體表面，特別是在培養(yǎng)容器周邊附近。

    其次，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞常規(guī)形態(tài)和生長(zhǎng)狀態(tài)，留意檢查任何鏡下可見(jiàn)的微生物污染的跡象。在某些細(xì)胞系中，培養(yǎng)液中漂浮的細(xì)胞通常是死亡的細(xì)胞。但是，許多細(xì)胞在進(jìn)行有絲分裂的時(shí)候也會(huì)變圓，形成折光性很強(qiáng)（很亮）的球體，并且在受到擾動(dòng)后也會(huì)飄浮起來(lái)。兩者的區(qū)別在于，死細(xì)胞通常會(huì)變圓脫落但一般折光性不會(huì)很強(qiáng)。

    除了這些日常檢查外，還需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行周期性的真菌、細(xì)菌以及支原體檢查。

    培養(yǎng)液的準(zhǔn)備：準(zhǔn)備針對(duì)特定細(xì)胞系在購(gòu)買或文獻(xiàn)中推薦使用的新鮮培養(yǎng)液，并用記號(hào)筆在培養(yǎng)容器上標(biāo)記傳代時(shí)間和細(xì)胞代數(shù)等信息。確保添加了補(bǔ)充成分（如：谷氨酰胺、生長(zhǎng)因子、抗生素等）并且預(yù)先放置培養(yǎng)箱進(jìn)行了pH平衡。一個(gè)75cm2的培養(yǎng)瓶大約需要12-15ml培養(yǎng)液，如何使用其他規(guī)格的培養(yǎng)容器需要進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整。