技術(shù)文章/ARTICLES

實(shí)驗(yàn)原理

在細(xì)胞核中，DNA是環(huán)狀附著在核基質(zhì)上，細(xì)胞裂解過(guò)程中，核基質(zhì)被溶解、抽提，DNA的結(jié)構(gòu)則未發(fā)生變化。如果DNA鏈上存在缺口，則使DNA超螺旋變的松弛，DNA環(huán)向外展，同時(shí)由于暴露了陰電荷，在電場(chǎng)力的作用下，松動(dòng)的DNA環(huán)向陽(yáng)極遷移，但是由于這種松動(dòng)的DNA環(huán)一端仍附著于核DNA，其遷移距離受到限制，因此尾長(zhǎng)并不總是真實(shí)反映鏈缺口的多少。實(shí)際應(yīng)當(dāng)依靠尾長(zhǎng)與尾部的熒光強(qiáng)度同時(shí)來(lái)進(jìn)行分析。

鏡檢和分析：
   1) 在熒光顯微鏡下觀察，綠光激發(fā)吸收濾片590nm。必要時(shí)照相記錄。
   2) 記數(shù)觀察的細(xì)胞，記錄彗星細(xì)胞出現(xiàn)的頻率，用目鏡測(cè)微尺測(cè)頭長(zhǎng)與全長(zhǎng)，計(jì)算核DNA遷移距離。

使用兩層凝膠法，經(jīng)裂解、DNA解旋、電泳和中和得到濕瓊脂糖凝膠片。將濕瓊脂糖凝膠片置于冰冷無(wú)水乙醇中脫水10分鐘，后置于空氣中自發(fā)干燥。全部操作在采血后8小時(shí)內(nèi)完成，操作過(guò)程中注意避光。使用50μl 30μM的溴乙錠溶液染色、照相。使用單細(xì)胞凝膠電泳軟件分析所有照片，隨機(jī)測(cè)量100個(gè)以上細(xì)胞的尾長(zhǎng)和olive尾矩，以尾長(zhǎng)和olive尾矩的算術(shù)均數(shù)代表個(gè)體DNA損傷情況。

英文名稱 Homo sapiens (Human) 囊泡乙酰膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(VAChT)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格： 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 囊泡單胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(VMAT2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格： 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 耐氧化性能蛋白1(OXR1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格： 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 耐扭蛋白3A(TOR3A)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格： 48T/96T
細(xì)胞英文名稱 Homo sapiens (Human) 耐扭蛋白2A(TOR2A)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格： 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 耐扭蛋白1B(TOR1B)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格： 48T/96T